آٹولوگس نیوکلئس پلپوسس نے موڈک تبدیلیوں کا جانوروں کا ماڈل بنانے کے لئے لمبر سبکونڈرل ہڈی میں لگائے

فطرت ڈاٹ کام دیکھنے کے لئے آپ کا شکریہ۔ آپ جس براؤزر ورژن کو استعمال کررہے ہیں اس میں سی ایس ایس کی محدود سپورٹ ہے۔ بہترین نتائج کے ل we ، ہم تجویز کرتے ہیں کہ ایک نیا براؤزر (یا انٹرنیٹ ایکسپلورر میں مطابقت پذیری کو غیر فعال کریں)۔ اس دوران ، مسلسل مدد کو یقینی بنانے کے لئے ، ہم سائٹ کو بغیر اسٹائل اور جاوا اسکرپٹ کے ڈسپلے کریں گے۔
موڈک چینج (ایم سی) کے جانوروں کے ماڈلز کا قیام ایم سی کے مطالعہ کے لئے ایک اہم بنیاد ہے۔ پچاس نیوزی لینڈ کے سفید خرگوشوں کو شرم-آپریشن گروپ ، پٹھوں کی امپلانٹیشن گروپ (ایم ای گروپ) اور نیوکلئس پلپوسس ایمپلانٹیشن گروپ (این پی ای گروپ) میں تقسیم کیا گیا تھا۔ این پی ای گروپ میں ، انٹرورٹیبرل ڈسک کو انٹراولیٹرل لمبر سرجیکل نقطہ نظر سے بے نقاب کیا گیا تھا اور آخر پلیٹ کے قریب ایل 5 ورٹیربل جسم کو پنکچر کرنے کے لئے ایک انجکشن استعمال کی گئی تھی۔ این پی کو سرنج کے ذریعہ L1/2 انٹرورٹیبرل ڈسک سے نکالا گیا تھا اور اس میں انجکشن لگایا گیا تھا۔ subchondral ہڈی میں سوراخ کی کھدائی کرنا۔ پٹھوں کے امپلانٹیشن گروپ اور شرم-آپریشن گروپ میں جراحی کے طریقہ کار اور سوراخ کرنے کے طریقے این پی ایمپلانٹیشن گروپ میں شامل تھے۔ ایم ای گروپ میں ، پٹھوں کا ایک ٹکڑا سوراخ میں رکھا گیا تھا ، جبکہ شرم-آپریشن گروپ میں ، سوراخ میں کچھ بھی نہیں رکھا گیا تھا۔ آپریشن کے بعد ، ایم آر آئی اسکیننگ اور سالماتی حیاتیاتی جانچ کی گئی۔ این پی ای گروپ میں سگنل بدل گیا ، لیکن شم-آپریشن گروپ اور ایم ای گروپ میں کوئی واضح سگنل میں کوئی تبدیلی نہیں آئی۔ ہسٹولوجیکل مشاہدے سے پتہ چلتا ہے کہ امپلانٹیشن سائٹ پر غیر معمولی ٹشو پھیلاؤ کا مشاہدہ کیا گیا تھا ، اور این پی ای گروپ میں IL-4 ، IL-17 اور IFN-γ کے اظہار میں اضافہ کیا گیا تھا۔ سبکونڈرل ہڈی میں این پی کی ایمپلانٹیشن ایم سی کا جانوروں کا ماڈل تشکیل دے سکتی ہے۔
موڈک تبدیلیاں (ایم سی) مقناطیسی گونج امیجنگ (ایم آر آئی) پر نظر آنے والے کشیرکا اینڈ پلیٹس اور ملحقہ ہڈی میرو کے گھاووں ہیں۔ وہ وابستہ علامات 1 کے حامل افراد میں کافی عام ہیں۔ بہت سارے مطالعات نے کم پیٹھ میں درد (ایل بی پی) 2،3 کے ساتھ وابستگی کی وجہ سے ایم سی کی اہمیت پر زور دیا ہے۔ ڈی روس ET al.4 اور موڈک ET al.5 نے آزادانہ طور پر کشیرکا ہڈی میرو میں تین مختلف اقسام کے سبکونڈرل سگنل کی اسامانیتاوں کو بیان کیا۔ موڈک قسم I میں تبدیلیاں T1-Weighted (T1W) کی ترتیب پر ہائپوٹینس اور T2-Weighted (T2W) تسلسل پر ہائپرینٹینس ہیں۔ اس گھاووں سے ہڈیوں کے میرو میں فشر اینڈ پلیٹس اور ملحقہ عروقی دانے دار ٹشو کا پتہ چلتا ہے۔ موڈک ٹائپ II میں تبدیلیاں T1W اور T2W دونوں ترتیبوں پر اعلی سگنل دکھاتی ہیں۔ اس قسم کے گھاووں میں ، اینڈ پلیٹ کی تباہی مل سکتی ہے ، اسی طرح ملحقہ ہڈی میرو کی ہسٹولوجیکل فیٹی متبادل بھی مل سکتی ہے۔ موڈک قسم III تبدیلیاں T1W اور T2W ترتیب میں کم سگنل دکھاتی ہیں۔ اینڈ پلیٹس کے مطابق اسکلیروٹک گھاووں کا مشاہدہ کیا گیا ہے۔ ایم سی کو ریڑھ کی ہڈی کا ایک پیتھولوجیکل بیماری سمجھا جاتا ہے اور وہ ریڑھ کی ہڈی 7،8،9 کی بہت سی انحطاطی بیماریوں کے ساتھ قریب سے وابستہ ہے۔
دستیاب اعداد و شمار پر غور کرتے ہوئے ، متعدد مطالعات نے ایم سی کے ایٹولوجی اور پیتھولوجیکل میکانزم کے بارے میں تفصیلی بصیرت فراہم کی ہے۔ البرٹ ایٹ ال۔ تجویز کیا کہ ایم سی ڈسک ہرنائزیشن 8 کی وجہ سے ہوسکتا ہے۔ Hu et al. ایم سی کو شدید ڈسک انحطاط 10 سے منسوب کیا۔ کے آر او سی نے "اندرونی ڈسک پھٹ جانے" کے تصور کی تجویز پیش کی ، جس میں کہا گیا ہے کہ بار بار ڈسک کا صدمہ اینڈ پلیٹ میں مائکروٹیرس کا باعث بن سکتا ہے۔ درار کی تشکیل کے بعد ، نیوکلئس پلپوسس (این پی) کے ذریعہ اینڈپلیٹ تباہی کو خود کار طریقے سے ردعمل پیدا ہوسکتا ہے ، جس کی وجہ سے ایم سی 11 کی ترقی ہوتی ہے۔ ما ET رحمہ اللہ تعالی. اسی طرح کا نظریہ شیئر کیا اور بتایا کہ ایم سی 12 کے روگجنن میں این پی کی حوصلہ افزائی آٹومیومیٹی کلیدی کردار ادا کرتی ہے۔
مدافعتی نظام کے خلیات ، خاص طور پر CD4+ T مددگار لیمفوسائٹس ، آٹومیمونیٹی 13 کے روگجنن میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ حال ہی میں دریافت ہونے والا TH17 سب سیٹ پروینفلامیٹری سائٹوکائن IL-17 تیار کرتا ہے ، کیموکین اظہار کو فروغ دیتا ہے ، اور IFN-γ14 پیدا کرنے کے لئے خراب اعضاء میں ٹی خلیوں کو متحرک کرتا ہے۔ مدافعتی ردعمل کے روگجنن میں TH2 خلیات بھی ایک انوکھا کردار ادا کرتے ہیں۔ نمائندہ TH2 سیل کے طور پر IL-4 کا اظہار شدید امیونوپیتھولوجیکل نتائج 15 کا باعث بن سکتا ہے۔
اگرچہ MC16،17،18،19،19،19،21،21،22،23،24 پر MC16،17،18،18،19،19،19،19،21،22،23،24 پر بہت سارے کلینیکل مطالعات کی گئی ہیں ، ابھی بھی جانوروں کے مناسب تجرباتی ماڈلز کی کمی ہے جو ایم سی کے عمل کی نقل کرسکتی ہے جو اکثر انسانوں میں ہوتی ہے اور ہوسکتی ہے اور ہوسکتی ہے۔ ایٹولوجی یا نئے علاج جیسے ٹارگٹ تھراپی کی تحقیقات کے لئے استعمال کیا جاتا ہے۔ آج تک ، ایم سی کے صرف چند جانوروں کے ماڈلز کو بنیادی پیتھولوجیکل میکانزم کا مطالعہ کرنے کی اطلاع ملی ہے۔
البرٹ اور ایم اے کے تجویز کردہ آٹومیمون تھیوری کی بنیاد پر ، اس مطالعے نے کھودے ہوئے کشیرکا اختتام پلیٹ کے قریب این پی کو آٹومرانسپلانٹ کرکے ایک سادہ اور تولیدی خرگوش ایم سی ماڈل قائم کیا۔ دوسرے مقاصد جانوروں کے ماڈلز کی ہسٹولوجیکل خصوصیات کا مشاہدہ کرنا اور ایم سی کی ترقی میں این پی کے مخصوص میکانزم کا اندازہ کرنا ہے۔ اس مقصد کے ل we ، ہم ایم سی کی ترقی کا مطالعہ کرنے کے لئے سالماتی حیاتیات ، ایم آر آئی ، اور ہسٹولوجیکل اسٹڈیز جیسی تکنیک کا استعمال کرتے ہیں۔
سرجری کے دوران دو خرگوش خون بہنے سے فوت ہوگئے ، اور ایم آر آئی کے دوران اینستھیزیا کے دوران چار خرگوش فوت ہوگئے۔ بقیہ 48 خرگوش زندہ بچ گئے اور سرجری کے بعد کوئی طرز عمل یا اعصابی علامات نہیں دکھائے گئے۔
ایم آر آئی سے پتہ چلتا ہے کہ مختلف سوراخوں میں سرایت شدہ ٹشو کی سگنل کی شدت مختلف ہے۔ این پی ای گروپ میں L5 کشیرکا جسم کی سگنل کی شدت آہستہ آہستہ 12 ، 16 اور 20 ہفتوں میں داخل ہونے کے بعد تبدیل ہوگئی (T1W تسلسل نے کم سگنل دکھایا ، اور T2W تسلسل نے مخلوط سگنل پلس کم سگنل دکھایا) (تصویر 1 سی) ، جبکہ ایم آر آئی کی نمائش ایمبیڈڈ حصوں کے دیگر دو گروہوں میں سے اسی مدت کے دوران نسبتا مستحکم رہا (تصویر 1 اے ، بی)۔
(a) Rabbit lumbar ریڑھ کی ہڈی کے نمائندہ ترتیب وار MRIs 3 ٹائم پوائنٹس پر۔ شم آپریشن گروپ کی تصاویر میں کوئی سگنل کی اسامانیتا نہیں ملی۔ (ب) ایم ای گروپ میں کشیرکا جسم کی سگنل کی خصوصیات شم-آپریشن گروپ میں مماثل ہیں ، اور وقت کے ساتھ ایمبیڈنگ سائٹ پر کوئی اہم سگنل کی تبدیلی نہیں دیکھی جاتی ہے۔ (c) این پی ای گروپ میں ، کم سگنل T1W تسلسل میں واضح طور پر نظر آتا ہے ، اور مخلوط سگنل اور کم سگنل T2W ترتیب میں واضح طور پر نظر آتا ہے۔ 12 ہفتوں کی مدت سے 20 ہفتوں کی مدت تک ، T2W ترتیب میں کم سگنلز کے آس پاس کے چھٹپٹ والے اعلی سگنل کم ہوجاتے ہیں۔
واضح ہڈی ہائپرپلاسیا این پی ای گروپ میں کشیرکا جسم کے امپلانٹیشن سائٹ پر دیکھا جاسکتا ہے ، اور ہڈی ہائپرپلاسیا این پی ای گروپ کے مقابلے میں 12 سے 20 ہفتوں (تصویر 2 سی) تک تیزی سے ہوتا ہے ، ماڈلنگ ورٹیربرل میں کوئی خاص تبدیلی نہیں دیکھی جاتی ہے۔ لاشیں ؛ شم گروپ اور می گروپ (تصویر 2 سی) 2 اے ، بی)۔
(a) پرتیارے حصے پر کشیرکا جسم کی سطح بہت ہموار ہوتی ہے ، سوراخ اچھی طرح سے ٹھیک ہوتا ہے ، اور کشیرکا جسم میں ہائپرپلاسیا نہیں ہوتا ہے۔ (ب) ایم ای گروپ میں ایمپلانٹڈ سائٹ کی شکل شرم کے آپریشن گروپ میں ملتی جلتی ہے ، اور وقت کے ساتھ ساتھ امپلانٹ سائٹ کی ظاہری شکل میں کوئی واضح تبدیلی نہیں ہے۔ (c) ہڈی ہائپرپالسیا این پی ای گروپ میں پرتیاروپت سائٹ پر واقع ہوا ہے۔ ہڈی ہائپرپلاسیا میں تیزی سے اضافہ ہوا اور یہاں تک کہ انٹرورٹیبرل ڈسک کے ذریعے متضاد کشیرکا جسم تک بڑھایا گیا۔
ہسٹولوجیکل تجزیہ ہڈیوں کی تشکیل کے بارے میں مزید تفصیلی معلومات فراہم کرتا ہے۔ چترا 3 میں H&E کے ساتھ داغدار postoperative کے حصوں کی تصاویر کو دکھایا گیا ہے۔ شم-آپریشن گروپ میں ، چونڈروسائٹس کا اچھی طرح سے اہتمام کیا گیا تھا اور کسی سیل کے پھیلاؤ کا پتہ نہیں چل سکا (تصویر 3A)۔ ایم ای گروپ میں صورتحال شرم و حیااتی گروپ (تصویر 3B) میں ملتی جلتی تھی۔ تاہم ، این پی ای گروپ میں ، ایمپلانٹیشن سائٹ (تصویر 3 سی) پر این پی جیسے خلیوں کے chondrocytes اور پھیلاؤ کا مشاہدہ کیا گیا۔
(a) ٹریبیکولا کو آخر پلیٹ کے قریب دیکھا جاسکتا ہے ، chondrocytes صاف طور پر سیل کے سائز اور شکل اور کوئی پھیلاؤ (40 بار) کے ساتھ بندوبست کیا جاتا ہے۔ (ب) ایم ای گروپ میں ایمپلانٹیشن سائٹ کی حالت شرم گروپ کی طرح ہے۔ trabeculae اور chondrocytes دیکھے جاسکتے ہیں ، لیکن امپلانٹیشن سائٹ (40 بار) میں کوئی واضح پھیلاؤ نہیں ہے۔ (ب) یہ دیکھا جاسکتا ہے کہ چونڈروسائٹس اور این پی جیسے خلیات نمایاں طور پر پھیلتے ہیں ، اور chondrocytes کی شکل اور سائز ناہموار (40 بار) ہے۔
این پی ای اور ایم ای دونوں گروپوں میں انٹیلیوکن 4 (IL-4) ایم آر این اے ، انٹلییوکن 17 (IL-17) ایم آر این اے ، اور انٹرفیرون γ (IFN-γ) ایم آر این اے کا اظہار دیکھا گیا۔ جب ہدف جینوں کے اظہار کی سطح کا موازنہ کیا گیا تو ، IL-4 ، IL-17 ، اور IFN-γ کے جین کے اظہار ME گروپ اور شرم آپریشن گروپ کے مقابلے میں NPE گروپ میں نمایاں طور پر اضافہ کیا گیا تھا (تصویر 4) (پی <0.05)۔ شم آپریشن گروپ کے مقابلے میں ، ME گروپ میں IL-4 ، IL-17 ، اور IFN-of کے اظہار کی سطح میں صرف تھوڑا سا اضافہ ہوا اور وہ اعداد و شمار کی تبدیلی (P> 0.05) تک نہیں پہنچا۔
این پی ای گروپ میں IL-4 ، IL-17 اور IFN-of کے ایم آر این اے اظہار نے شم آپریشن گروپ اور ایم ای گروپ (پی <0.05) کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ رجحان ظاہر کیا۔
اس کے برعکس ، ME گروپ میں اظہار کی سطح میں کوئی خاص فرق نہیں دکھایا گیا (P> 0.05)۔
مغربی بلٹ تجزیہ IL-4 اور IL-17 کے خلاف تجارتی طور پر دستیاب اینٹی باڈیوں کا استعمال کرتے ہوئے تبدیل شدہ ایم آر این اے اظہار کے نمونہ کی تصدیق کے لئے کیا گیا تھا۔ جیسا کہ اعداد و شمار 5A ، B میں دکھایا گیا ہے ، ME گروپ اور شم آپریشن گروپ کے مقابلے میں ، NPE گروپ میں IL-4 اور IL-17 کے پروٹین کی سطح میں نمایاں اضافہ ہوا (P <0.05)۔ شم آپریشن گروپ کے مقابلے میں ، ME گروپ میں IL-4 اور IL-17 کی پروٹین کی سطح بھی اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم تبدیلیوں (P> 0.05) تک پہنچنے میں ناکام رہی۔
(A) NPE گروپ میں IL-4 اور IL-17 کی پروٹین کی سطح ME گروپ اور پلیسبو گروپ (P <0.05) کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھی۔ (b) مغربی بلٹ ہسٹوگرام۔
سرجری کے دوران حاصل کردہ انسانی نمونوں کی محدود تعداد کی وجہ سے ، ایم سی کے روگجنن پر واضح اور تفصیلی مطالعات کچھ مشکل ہیں۔ ہم نے اس کے ممکنہ پیتھولوجیکل میکانزم کا مطالعہ کرنے کے لئے ایم سی کا جانوروں کا ماڈل قائم کرنے کی کوشش کی۔ ایک ہی وقت میں ، این پی آٹوگرافٹ کے ذریعہ ایم سی کے کورس کی پیروی کرنے کے لئے ریڈیولوجیکل تشخیص ، ہسٹولوجیکل تشخیص اور سالماتی حیاتیاتی تشخیص کا استعمال کیا گیا تھا۔ نتیجے کے طور پر ، این پی امپلانٹیشن ماڈل کے نتیجے میں سگنل کی شدت میں بتدریج تبدیلی 12 ہفتوں سے 20 ہفتوں کے ٹائم پوائنٹس (T1W ترتیب میں مخلوط کم سگنل اور T2W ترتیب میں کم سگنل) تک ، ٹشو کی تبدیلیوں کی نشاندہی کرتی ہے ، اور ہسٹولوجیکل اور سالماتی ہے۔ حیاتیاتی تشخیص نے ریڈیولوجیکل اسٹڈی کے نتائج کی تصدیق کی۔
اس تجربے کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ این پی ای گروپ میں جسمانی خلاف ورزی کے مقام پر بصری اور ہسٹولوجیکل تبدیلیاں واقع ہوئی ہیں۔ ایک ہی وقت میں ، IL-4 ، IL-17 اور IFN-γ جینوں کے ساتھ ساتھ IL-4 ، IL-17 اور IFN-γ کا اظہار مشاہدہ کیا گیا ، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ کشیرکا میں آٹولوگس نیوکلئس پلپوسس ٹشو کی خلاف ورزی جسم سگنل اور اخلاقی تبدیلیوں کی ایک سیریز کا سبب بن سکتا ہے۔ یہ جاننا آسان ہے کہ جانوروں کے ماڈل کے کشیرکا جسموں کی سگنل کی خصوصیات (T1W تسلسل میں کم سگنل ، T2W ترتیب میں مخلوط سگنل اور کم سگنل) انسانی کشیرکا خلیوں کی طرح ہی ہے ، اور ایم آر آئی کی خصوصیات بھی۔ ہسٹولوجی اور مجموعی اناٹومی کے مشاہدات کی تصدیق کریں ، یعنی جسمانی خلیوں میں تبدیلیاں ترقی پسند ہیں۔ اگرچہ شدید صدمے کی وجہ سے ہونے والا سوزش ردعمل پنکچر کے فورا. بعد ظاہر ہوسکتا ہے ، لیکن ایم آر آئی کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ آہستہ آہستہ بڑھتی ہوئی سگنل کی تبدیلیاں پنکچر کے 12 ہفتوں کے بعد ظاہر ہوئی ہیں اور 20 ہفتوں تک کی بحالی کی علامت یا ایم آر آئی کی تبدیلیوں کے الٹ جانے کی علامت ہیں۔ ان نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ خرگوشوں میں ترقی پسند ایم وی کے قیام کے لئے آٹولوگس کشیرکا این پی ایک قابل اعتماد طریقہ ہے۔
اس پنچر ماڈل کے لئے مناسب مہارت ، وقت اور جراحی کی کوشش کی ضرورت ہے۔ ابتدائی تجربات میں ، پیراورٹیبرل ligamentous ڈھانچے کی بازی یا ضرورت سے زیادہ محرک کے نتیجے میں کشیرکا آسٹیوفائٹس کی تشکیل ہوسکتی ہے۔ اس سے ملحقہ ڈسکس کو نقصان یا پریشان نہ کرنے کا خیال رکھنا چاہئے۔ چونکہ مستقل اور تولیدی نتائج حاصل کرنے کے لئے دخول کی گہرائی کو کنٹرول کرنا ضروری ہے ، لہذا ہم نے دستی طور پر 3 ملی میٹر لمبی سوئی کی میان کو کاٹ کر پلگ بنایا۔ اس پلگ کا استعمال کشیرکا جسم میں یکساں سوراخ کرنے والی گہرائی کو یقینی بناتا ہے۔ ابتدائی تجربات میں ، آپریشن میں شامل تین آرتھوپیڈک سرجنوں نے 16 گیج کی سوئیاں 18 گیج سوئیاں یا دیگر طریقوں سے کام کرنے میں آسانی سے پائی گئیں۔ سوراخ کرنے کے دوران ضرورت سے زیادہ خون بہنے سے بچنے کے ل still ، سوئی کو تھوڑی دیر کے لئے رکھے جانے سے زیادہ مناسب اندراج کا سوراخ فراہم ہوگا ، جس سے یہ معلوم ہوتا ہے کہ ایم سی کی ایک خاص ڈگری کو اس طرح سے کنٹرول کیا جاسکتا ہے۔
اگرچہ بہت سارے مطالعات نے ایم سی کو نشانہ بنایا ہے ، لیکن ایم سی 25،26،27 کے ایٹولوجی اور روگجنن کے بارے میں بہت کم معلوم ہے۔ ہمارے پچھلے مطالعات کی بنیاد پر ، ہم نے محسوس کیا کہ ایم سی 12 کی موجودگی اور ترقی میں آٹومیومیٹی کلیدی کردار ادا کرتی ہے۔ اس مطالعے میں IL-4 ، IL-17 ، اور IFN-γ کے مقداری اظہار کی جانچ کی گئی ، جو اینٹیجن محرک کے بعد CD4+ خلیوں کے اہم تفریق والے راستے ہیں۔ ہمارے مطالعے میں ، منفی گروپ کے مقابلے میں ، این پی ای گروپ میں IL-4 ، IL-17 ، اور IFN-γ کا زیادہ اظہار تھا ، اور IL-4 اور IL-17 کی پروٹین کی سطح بھی زیادہ تھی۔
طبی لحاظ سے ، IL-17 mRNA اظہار DISC Herniation28 کے مریضوں سے NP خلیوں میں بڑھایا جاتا ہے۔ صحت مند کنٹرول 29 کے مقابلے میں IL-4 اور IFN-γ اظہار کی سطح میں بھی اضافہ ہوا۔ IL-17 سوزش ، آٹومیمون بیماریوں میں ٹشو کی چوٹ میں کلیدی کردار ادا کرتا ہے 30 اور IFN-γ31 کے مدافعتی ردعمل میں اضافہ کرتا ہے۔ ایم آر ایل/ایل پی آر چوہوں 32 اور آٹومیومینیٹی سے دوچار چوہوں 33 میں IL-17 ثالثی ٹشو کی چوٹ کی اطلاع دی گئی ہے۔ IL-4 پروانفلامیٹری سائٹوکائنز (جیسے IL-1β اور TNFα) اور میکروفیج ایکٹیویشن 34 کے اظہار کو روک سکتا ہے۔ یہ اطلاع دی گئی ہے کہ IL-4 کا ایم آر این اے اظہار NPE گروپ میں ایک ہی وقت میں IL-17 اور IFN-γ کے مقابلے میں مختلف تھا۔ این پی ای گروپ میں IFN-of کا ایم آر این اے اظہار دوسرے گروپوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھا۔ لہذا ، IFN-γ پیداوار NP انٹرکلیشن کے ذریعہ سوزش کے ردعمل کا ثالث ہوسکتی ہے۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ IFN-γ ایک سے زیادہ سیل اقسام کے ذریعہ تیار کیا جاتا ہے ، جس میں چالو قسم 1 مددگار ٹی خلیات ، قدرتی قاتل خلیات ، اور میکروفیجس 35،36 شامل ہیں ، اور یہ ایک اہم سوزش سائٹوکائن ہے جو مدافعتی ردعمل کو فروغ دیتا ہے۔
اس مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ خود کار ردعمل ایم سی کی موجودگی اور ترقی میں شامل ہوسکتا ہے۔ لووما ایٹ ال۔ پتہ چلا ہے کہ ایم سی اور ممتاز این پی کی سگنل کی خصوصیات ایم آر آئی پر ایک جیسی ہیں ، اور دونوں ٹی 2 ڈبلیو سیکوینس 38 میں اعلی سگنل دکھاتے ہیں۔ کچھ سائٹوکائنز کو ایم سی کی موجودگی ، جیسے IL-139 کے ساتھ قریب سے وابستہ ہونے کی تصدیق ہوگئی ہے۔ ما ET رحمہ اللہ تعالی. تجویز کیا کہ این پی کے اوپر یا نیچے کی طرف پھیلاؤ ایم سی 12 کی موجودگی اور ترقی پر بہت زیادہ اثر ڈال سکتا ہے۔ بوبیچکو 40 اور ہرزبین ET ال .41 نے اطلاع دی ہے کہ این پی ایک امیونوٹولر ٹشو ہے جو پیدائش سے عروقی گردش میں داخل نہیں ہوسکتا ہے۔ این پی پروٹروژن غیر ملکی اداروں کو خون کی فراہمی میں متعارف کراتے ہیں ، اور اس طرح مقامی آٹومیمون رد عمل 42 میں ثالثی کرتے ہیں۔ آٹومیمون رد عمل سے مدافعتی عوامل کی ایک بڑی تعداد کو راغب کیا جاسکتا ہے ، اور جب ان عوامل کو ٹشووں کے سامنے مستقل طور پر سامنے لایا جاتا ہے تو ، وہ سگنلنگ 43 میں تبدیلیوں کا سبب بن سکتے ہیں۔ اس مطالعے میں ، IL-4 ، IL-17 اور IFN-of کی حد سے زیادہ اظہار خیال مدافعتی عوامل ہیں ، جو NP اور MCS44 کے مابین قریبی تعلقات کو مزید ثابت کرتے ہیں۔ یہ جانوروں کا ماڈل این پی کی پیشرفت اور اختتامی پلیٹ میں داخلے کی اچھی طرح سے نقل کرتا ہے۔ اس عمل نے ایم سی پر خود کار طریقے سے ہونے والے اثرات کا انکشاف کیا۔
جیسا کہ توقع کی گئی ہے ، یہ جانوروں کا ماڈل ہمیں ایم سی کا مطالعہ کرنے کے لئے ایک ممکنہ پلیٹ فارم مہیا کرتا ہے۔ تاہم ، اس ماڈل میں اب بھی کچھ حدود ہیں: او ly ل ، جانوروں کے مشاہدے کے مرحلے کے دوران ، ہسٹولوجیکل اور سالماتی حیاتیات کی جانچ کے ل some کچھ انٹرمیڈیٹ مرحلے کے خرگوشوں کو خوشنودی کی ضرورت ہے ، لہذا کچھ جانور وقت کے ساتھ ساتھ "استعمال سے باہر ہوجاتے ہیں"۔ دوم ، اگرچہ اس مطالعے میں تین ٹائم پوائنٹس طے کیے گئے ہیں ، بدقسمتی سے ، ہم نے صرف ایک قسم کے ایم سی (موڈک قسم I میں تبدیلی) کی ماڈلنگ کی ، لہذا یہ انسانی بیماری کی نشوونما کے عمل کی نمائندگی کرنے کے لئے کافی نہیں ہے ، اور مزید وقت کے نکات کو طے کرنے کی ضرورت ہے۔ سگنل کی تمام تبدیلیوں کو بہتر طور پر مشاہدہ کریں۔ تیسرا ، ٹشو ڈھانچے میں ہونے والی تبدیلیوں کو واقعی ہسٹولوجیکل داغ کے ذریعہ واضح طور پر دکھایا جاسکتا ہے ، لیکن کچھ خصوصی تکنیک اس ماڈل میں مائکرو اسٹرکچرل تبدیلیوں کو بہتر طور پر ظاہر کرسکتی ہیں۔ مثال کے طور پر ، پولرائزڈ لائٹ مائکروسکوپی کا استعمال خرگوش انٹرورٹیبرل ڈس 45 میں فائبروکارٹلیج کی تشکیل کا تجزیہ کرنے کے لئے کیا گیا تھا۔ ایم سی اور اینڈ پلیٹ پر این پی کے طویل مدتی اثرات کے لئے مزید مطالعہ کی ضرورت ہے۔
پچپن مرد نیوزی لینڈ کے سفید خرگوش (وزن تقریبا 2.5 2.5-3 کلوگرام ، عمر 3-3.5 ماہ) کو تصادفی طور پر شرم آپریشن گروپ ، پٹھوں کی امپلانٹیشن گروپ (ME گروپ) اور اعصابی روٹ ایمپلانٹیشن گروپ (NPE گروپ) میں تقسیم کیا گیا تھا۔ تمام تجرباتی طریقہ کار کو تیآنجن اسپتال کی اخلاقیات کمیٹی نے منظور کیا تھا ، اور تجرباتی طریقے منظور شدہ رہنما خطوط کے مطابق سخت کیے گئے تھے۔
ایس سوبجیما 46 کی سرجیکل تکنیک میں کچھ بہتری لائی گئی ہے۔ ہر خرگوش کو پس منظر کی بدعنوانی کی پوزیشن میں رکھا گیا تھا اور پانچ لیمبر انٹرورٹبرل ڈسکس (IVDs) کی پچھلی سطح کو پوسٹرولیٹرل ریٹروپریٹونیل نقطہ نظر کا استعمال کرتے ہوئے بے نقاب کیا گیا تھا۔ ہر خرگوش کو جنرل اینستھیزیا (20 ٪ یوریتھین ، کان کی رگ کے ذریعے 5 ملی لیٹر/کلوگرام) دیا گیا تھا۔ ایک طول البلد جلد کا چیرا پسلیوں کے نچلے کنارے سے شرونیی کنارے تک بنایا گیا تھا ، 2 سینٹی میٹر وینٹرل کو پیراورٹیبرل پٹھوں تک۔ L1 سے L6 تک دائیں anterolateral ریڑھ کی ہڈی کو حد سے زیادہ subcutaneous ٹشو ، retroperitoneal ٹشو ، اور پٹھوں (تصویر 6A) کی تیز اور کند بازی سے بے نقاب کیا گیا تھا۔ ڈسک کی سطح کا تعین شرونیی کنارے کو L5-L6 ڈسک کی سطح کے لئے ایک جسمانی تاریخی نشان کے طور پر استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ L5 کشیرکا کی آخری پلیٹ کے قریب ایک سوراخ ڈرل کرنے کے لئے 16 گیج کے پنکچر انجکشن کا استعمال 3 ملی میٹر (تصویر 6B) کی گہرائی تک کریں۔ L1-L2 انٹرورٹیبرل ڈسک (تصویر 6C) میں آٹولوگس نیوکلئس پلپوسس کی خواہش کے لئے 5 ملی لیٹر سرنج کا استعمال کریں۔ ہر گروپ کی ضروریات کے مطابق نیوکلئس پلپوسس یا پٹھوں کو ہٹا دیں۔ ڈرل کے سوراخ کو گہرا ہونے کے بعد ، جاذب sutures گہری fascia ، سطحی fascia اور جلد پر رکھے جاتے ہیں ، اور اس بات کا خیال رکھتے ہیں کہ سرجری کے دوران کشیرکا جسم کے periosteal ٹشو کو نقصان نہ پہنچائیں۔
(a) L5 - L6 ڈسک کو پوسٹرولیٹرل ریٹروپریٹونیل نقطہ نظر کے ذریعے بے نقاب کیا جاتا ہے۔ (b) L5 endplate کے قریب سوراخ ڈرل کرنے کے لئے 16 گیج انجکشن کا استعمال کریں۔ (c) آٹولوگس ایم ایف کی کٹائی کی جاتی ہے۔
جنرل اینستھیزیا کو کان کی رگ کے ذریعے 20 ur یوریتھین (5 ملی لیٹر/کلوگرام) کے ساتھ زیر انتظام کیا گیا تھا ، اور ریڑھ کی ہڈی کے ریڈیوگراف کو 12 ، 16 ، اور 20 ہفتوں میں بعد میں دہرایا گیا تھا۔
سرجری کے 12 ، 16 اور 20 ہفتوں میں کیٹامین (25.0 ملی گرام/کلوگرام) کے انٹرماسکلر انجیکشن اور انٹراوینس سوڈیم پینٹوباربیٹل (1.2 جی/کلوگرام) کے ذریعہ خرگوشوں کی قربانی دی گئی۔ ہسٹولوجیکل تجزیہ کے لئے پوری ریڑھ کی ہڈی کو ہٹا دیا گیا تھا اور حقیقی تجزیہ کیا گیا تھا۔ مدافعتی عوامل میں تبدیلیوں کا پتہ لگانے کے لئے مقداری ریورس ٹرانسکرپشن (RT-QPCR) اور مغربی بلاٹنگ کا استعمال کیا گیا تھا۔
ایم آر آئی کے امتحانات خرگوشوں میں 3.0 ٹی کلینیکل مقناطیس (جی ای میڈیکل سسٹمز ، فلورنس ، ایس سی) کا استعمال کرتے ہوئے ایک آرتھوگونل اعضاء کنڈلی وصول کرنے والے سے لیس تھے۔ خرگوشوں کو کان کی رگ کے ذریعے 20 ur یوریتھین (5 ملی لیٹر/کلوگرام) کے ساتھ اینستھیٹائز کیا گیا تھا اور پھر 5 انچ قطر کے سرکلر سطح کنڈلی (جی ای میڈیکل سسٹم) پر مرکوز لمبر خطے کے ساتھ مقناطیس کے اندر سوپائن رکھی گئی تھی۔ L3-L4 سے L5-L6 تک لمبر ڈسک کے مقام کی وضاحت کے لئے کورونل ٹی 2 وزٹ لوکلائزر امیجز (ٹی آر ، 1445 ایم ایس ؛ ٹی ای ، 37 ایم ایس) حاصل کیا گیا تھا۔ ساگٹٹل ہوائی جہاز T2 وزنی سلائسین مندرجہ ذیل ترتیبات کے ساتھ حاصل کی گئیں: 2200 ایم ایس کے تکرار ٹائم (TR) کے ساتھ تیز اسپن ایکو تسلسل اور 70 ایم ایس ، میٹرکس کے گونج ٹائم (TE) ؛ 260 اور آٹھ محرکات کا بصری میدان ؛ کاٹنے کی موٹائی 2 ملی میٹر تھی ، خلا 0.2 ملی میٹر تھا۔
آخری تصویر کھینچنے اور آخری خرگوش کو ہلاک کرنے کے بعد ، ہسٹولوجیکل معائنے کے لئے شرم ، پٹھوں سے ملحق ، اور این پی ڈسکس کو ہٹا دیا گیا۔ ؤتکوں کو 10 ٪ غیر جانبدار بفرڈ فارملین میں 1 ہفتہ کے لئے طے کیا گیا تھا ، جو ایتھیلینیڈیمینیٹیٹرااسیٹک ایسڈ کے ساتھ تعی .ن کیا گیا تھا ، اور پیرافین سیکشن کیا گیا تھا۔ ٹشو بلاکس کو پیرافن میں سرایت کیا گیا تھا اور مائکروٹوم کا استعمال کرتے ہوئے سگٹٹل حصوں (5 μm موٹی) میں کاٹا گیا تھا۔ حصوں کو ہیماتوکسیلین اور ایوسین (H&E) سے داغ دیا گیا تھا۔
ہر گروپ میں خرگوشوں سے انٹرورٹیبرل ڈسکس جمع کرنے کے بعد ، کارخانہ دار کی ہدایات اور ایک امپرووم II ریورس ٹرانسکرپٹ سسٹم (پرومیگا انکارپوریٹڈ (پرومیگا انکارپوریٹڈ) کے مطابق ، کل آر این اے کو یونیک 10 کالم (شنگھائی سانگن بائیوٹیکنالوجی کمپنی ، لمیٹڈ ، چین) کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا۔ ، میڈیسن ، WI ، USA)۔ ریورس ٹرانسکرپشن انجام دیا گیا تھا۔
کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق آر ٹی-کیو پی سی آر پرزم 7300 (اپلائیڈ بائیو سسٹم انکارپوریشن ، یو ایس اے) اور ایس وائی بی آر گرین جمپ اسٹارٹ ٹی اے کیو ریڈیمکس (سگما الڈرچ ، سینٹ لوئس ، ایم او ، امریکہ) کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا۔ پی سی آر کے رد عمل کا حجم 20 μL تھا اور اس میں 1.5 μl کمزور سی ڈی این اے اور ہر پرائمر کا 0.2 μm تھا۔ پرائمر اولیگوپرفیکٹ ڈیزائنر (انویٹروجن ، والنسیا ، سی اے) کے ذریعہ ڈیزائن کیے گئے تھے اور نانجنگ گولڈن اسٹیورٹ بائیوٹیکنالوجی کمپنی ، لمیٹڈ (چین) (ٹیبل 1) کے ذریعہ تیار کیا گیا تھا۔ مندرجہ ذیل تھرمل سائیکلنگ کے حالات استعمال کیے گئے تھے: ابتدائی پولیمریز ایکٹیویشن مرحلہ 2 منٹ کے لئے 94 ° C پر ، پھر ٹیمپلیٹ ڈینٹوریشن کے لئے 94 ° C پر ہر ایک کے 40 سائیکل ، 60 ° C پر 1 منٹ کے لئے اینیلنگ ، توسیع ، اور فلوروسینس۔ 72 ° C پر 1 منٹ کے لئے پیمائش کی گئی۔ تمام نمونے تین بار بڑھائے گئے تھے اور اوسط قیمت RT-QPCR تجزیہ کے لئے استعمال کی گئی تھی۔ فلیکس اسٹیشن 3 (مالیکیولر ڈیوائسز ، سنی ویل ، سی اے ، امریکہ) کا استعمال کرتے ہوئے پروردن کے اعداد و شمار کا تجزیہ کیا گیا۔ IL-4 ، IL-17 ، اور IFN-γ جین اظہار کو endogenous کنٹرول (ACTB) میں معمول بنایا گیا تھا۔ ٹارگٹ ایم آر این اے کے متعلقہ اظہار کی سطح کا حساب 2-ΔΔCT طریقہ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔
ٹشو لیسس بفر (جس میں ایک پروٹیز اور فاسفیٹیس انبیبیٹر کاک ٹیل پر مشتمل ہے) میں ٹشو ہوموگنائزر کا استعمال کرتے ہوئے ٹشووں سے کل پروٹین نکالا گیا تھا اور پھر ٹشو کے ملبے کو دور کرنے کے لئے 4 ° C پر 20 منٹ کے لئے 13،000 RPM پر سینٹرفیوج کیا گیا تھا۔ فی لین میں پچاس مائکروگرام پروٹین بھری ہوئی تھی ، جس کو 10 ٪ ایس ڈی ایس پیج سے الگ کیا گیا تھا ، اور پھر اسے پی وی ڈی ایف جھلی میں منتقل کردیا گیا تھا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹہ کے لئے 0.1 ٪ کے درمیان 0.1 ٪ کے درمیان 0.1 ٪ کے درمیان 5 ٪ نان فٹ خشک دودھ میں مسدود کرنا انجام دیا گیا تھا۔ اس جھلی کو خرگوش اینٹی ڈیکورین پرائمری اینٹی باڈی (گھٹا ہوا 1: 200 ؛ بوسٹر ، ووہان ، چین) کے ساتھ لگایا گیا تھا (گھٹا ہوا 1: 200 ؛ بایوس ، بیجنگ ، چین) راتوں رات 4 ° C پر اور دوسرے دنوں پر اس کا رد عمل ظاہر کیا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹہ کے لئے ہارسریڈش پیرو آکسیڈیس (بوسٹر ، ووہان ، چین) کے ساتھ مل کر ثانوی اینٹی باڈی (بکری اینٹی خرگوش امیونوگلوبلین جی 1: 40،000 کم) کے ساتھ۔ ایکس رے شعاع ریزی کے بعد کیمیلومینیسینٹ جھلی پر کیمیلومینیسینس میں اضافے کے ذریعہ مغربی بلاٹ سگنلز کا پتہ چلا۔ ڈینسٹومیٹرک تجزیہ کے ل band ، بینڈسکن سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے بلاٹس کو اسکین کیا گیا اور اس کی مقدار درست کردی گئی اور نتائج کو ٹیبلن امیونوراسٹیٹیٹی کے لئے ہدف جین امیونوراسٹیٹیٹی کے تناسب کے طور پر ظاہر کیا گیا۔
ایس پی ایس ایس 16.0 سافٹ ویئر پیکیج (ایس پی ایس ایس ، امریکہ) کا استعمال کرتے ہوئے اعداد و شمار کے حساب کتاب کیے گئے۔ مطالعے کے دوران جمع کردہ اعداد و شمار کا مطلب ± معیاری انحراف (مطلب ± SD) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا اور دونوں گروہوں کے مابین اختلافات کا تعین کرنے کے لئے ون وے بار بار ہونے والے اقدامات کے تغیرات (انووا) کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا تھا۔ پی <0.05 کو اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔
اس طرح ، کشیرکا جسم میں آٹولوگس این پی ایس لگانے اور میکروناٹومیٹک مشاہدے ، ایم آر آئی تجزیہ ، ہسٹولوجیکل تشخیص اور سالماتی حیاتیاتی تجزیہ کے ذریعہ ایم سی کے جانوروں کے ماڈل کا قیام انسانی ایم سی کے طریقہ کار کا اندازہ اور سمجھنے اور نئے علاج کو فروغ دینے کے لئے ایک اہم ذریعہ بن سکتا ہے۔ مداخلت
اس مضمون کا حوالہ کیسے کریں: ہان ، سی۔ وغیرہ۔ لیمبر ریڑھ کی ہڈی کی سبکونڈرل ہڈی میں آٹولوگس نیوکلئس پلپوسس کو لگاکر موڈک تبدیلیوں کا ایک جانوروں کا ماڈل قائم کیا گیا تھا۔ سائنس نمائندہ 6 ، 35102: 10.1038/SREP35102 (2016)۔
ویشاپٹ ، ڈی ، زینیٹی ، ایم ، ہڈلر ، جے ، اور بوز ، این. مقناطیسی گونج امیجنگ کی ریڑھ کی ہڈی کی پھیلاؤ: ڈسک ہرنائزیشن اور برقراری کا پھیلاؤ ، اعصابی جڑ کی کمپریشن ، اختتامی پلیٹ کی اسامانیتاوں ، اور اسیمپومیٹک رضاکاروں میں پہلو مشترکہ اوسٹیو ارتھرائٹس . شرح ریڈیولاجی 209 ، 661–666 ، doi: 10.1148/ریڈیولوجی .209.3.9844656 (1998)۔
کیجیر ، پی ، کورشولم ، ایل ، بینڈکس ، ٹی ، سورینسن ، جے ایس ، اور لیبیوف ایڈ ، کے موڈک تبدیلیاں اور ان کے طبی نتائج سے ان کے تعلقات۔ یورپی ریڑھ کی ہڈی جرنل: یورپی ریڑھ کی ہڈی سوسائٹی ، یورپی سوسائٹی آف ریڑھ کی ہڈی کی بدعنوانی ، اور یورپی سوسائٹی برائے گریوا ریڑھ کی ہڈی ریسرچ 15 ، 1312–1319 ، ڈی او آئی: 10.1007/S00586-006-0185-X (2006) کی سرکاری اشاعت۔
کویسما ، ایم ، وغیرہ۔ لمبر کشیرکا اینڈ پلیٹس میں موڈک تبدیلیاں: درمیانی عمر کے مرد کارکنوں میں کم پیٹھ میں درد اور اسکیاٹیکا کے ساتھ پھیلاؤ اور ایسوسی ایشن۔ ریڑھ کی ہڈی 32 ، 1116–1122 ، doi: 10.1097/01.BRS.0000261561.12944.FF (2007)۔
ڈی روس ، اے ، کریسیل ، ایچ ، اسپرٹزر ، کے ، اور ڈلنکا ، ایم ایم آر آئی بون میرو کی ایم آر آئی ریڑھ کی ہڈی کی ریڑھ کی ہڈی کی ڈیجنریٹو بیماری میں اختتامی پلیٹ کے قریب تبدیل ہوتی ہے۔ اجر۔ امریکن جرنل آف ریڈیولاجی 149 ، 531–534 ، doi: 10.2214/AJR.149.3.531 (1987)۔
موڈک ، ایم ٹی ، اسٹین برگ ، وزیر اعظم ، راس ، جے ایس ، مسارک ، ٹی جے ، اور کارٹر ، جے آر ڈیجنریٹو ڈسک بیماری: ایم آر آئی کے ساتھ کشیرکا میرو کی تبدیلیوں کی تشخیص۔ ریڈیولاجی 166 ، 193–199 ، doi: 10.1148/ریڈیولاجی .16.16.1.3336678 (1988)۔
موڈک ، ایم ٹی ، مسارک ، ٹی جے ، راس ، جے ایس ، اور کارٹر ، ڈیجنریٹو ڈسک کی بیماری کی جونیئر امیجنگ۔ ریڈیولاجی 168 ، 177–186 ، doi: 10.1148/ریڈیولوجی .168.1.3289089 (1988)۔
جینسن ، ٹی ایس ، وغیرہ۔ عام آبادی میں نیوورٹیبرل اینڈ پلیٹ (موڈک) سگنل میں تبدیلی کے پیش گو گو۔ یورپی ریڑھ کی ہڈی جرنل: یورپی ریڑھ کی ہڈی سوسائٹی ، یورپی سوسائٹی آف ریڑھ کی ہڈی کی بدعنوانی ، اور یورپی سوسائٹی برائے گریوا ریڑھ کی ہڈی ریسرچ ، ڈویژن 19 ، 129–135 ، ڈی او آئی: 10.1007/S00586-009-1184-5 (2010) کی سرکاری اشاعت۔
لمبر ڈسک ہرنائزیشن کے بعد البرٹ ، ایچ بی اور مانیشچ ، کے موڈک تبدیلیاں۔ یورپی ریڑھ کی ہڈی جرنل: یورپی ریڑھ کی ہڈی سوسائٹی ، یورپی سوسائٹی آف ریڑھ کی ہڈی کی بدعنوانی اور یورپی سوسائٹی برائے گریوا ریڑھ کی ہڈی ریسرچ 16 ، 977–982 ، doi: 10.1007/S00586-007-0336-8 (2007) کی سرکاری اشاعت۔
کیرٹولا ، ایل ، لووما ، کے ، وہسمز ، ٹی ، گرون بلڈ ، ایم ، اور کاپا ، ای۔ موڈک قسم I میں تبدیلیاں تیزی سے ترقی پسند اخترتی ڈسک انحطاط کی پیش گوئی کرسکتی ہیں: 1 سالہ ممکنہ مطالعہ۔ یورپی ریڑھ کی ہڈی جرنل 21 ، 1135–1142 ، doi: 10.1007/S00586-012-2147-9 (2012)۔
ہو ، زیڈ جے ، ژاؤ ، ایف ڈی ، فینگ ، ایکس کیو اور فین ، ایس ڈبلیو موڈک تبدیلیاں: لیمبر ڈسک انحطاط میں ممکنہ وجوہات اور شراکت۔ میڈیکل فرضی تصورات 73 ، 930–932 ، doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009)۔
کروک ، HV اندرونی ڈسک ٹوٹنا۔ ڈسک نے 50 سال سے زیادہ عرصے میں مسائل پیدا کردیئے۔ ریڑھ کی ہڈی (فلا پا 1976) 11 ، 650–653 (1986)۔